Óvintézkedések poliakrilamid gélelektroforézissel kapcsolatban

· poliakrilamidgélmust akrilamid monomerrel, polimerizációs kiindulási anyaggal, katalizátorral, valamint a jobb só és puffer keverékkel együtt.

· akrilamidés a BIS (N,N'-metilén-kettős akrilamid) a monomer formájú gélmátrix.

· ammónium-perszulfát ragasztópolimerizációs folyamat indítása.A ragasztó elkészítéséhez 10%-os vizes ammónium-perszulfát oldat szükséges.A legtöbb információ aktív használat szükségességét jelezte.A 10%-os oldat azonban 4°C-on több hétig is elhelyezhető jelentős aktivitásvesztés nélkül.Töltsük fel 10 ml-re, és dobjuk el, ha a ragasztó nem halmozódik fel.

Tipp: A százalékos arányakrilamida szekvenálásnál a ragasztó és a fehérjeragasztó nem ugyanaz.Ha előre elkészített akrilamid: BIS oldatot használ, ügyeljen arra, hogy a megfelelő palackot szerezze be.

· A TEMED (N,N,N',N'-tetrametil-etilén-diamin) katalizátor, barna üvegben, hűtőszekrénybe helyezve.Közvetlenül a ragasztó kiöntése előtt adjuk hozzá.

· poliakrilamid elektroforézis Az elektroforézishez használt üveget minden alkalommal le kell mosni előtte és utána.Elektroforézis után puha kefével és ruhával mossa le forró szappanos vízben, öblítse le desztillált vízzel, és hagyja megszáradni.

· üreges polimer esetén nedvességet és por okozhat.Elektroforézis előtt tisztítsa meg az üveglapot üvegtisztítóval, és törölje le puha kefével.Mossa le desztillált vízzel, és papírtörlővel alaposan szárítsa meg.A 70%-os etanollal történő öblítés a papírtörlés előtt segít a tisztításban és a száradás felgyorsításában.Adjunk hozzá akrilamid mintákat egymás után: BIS, víz, pufferoldat, ammónium-perszulfát, TEMED.Jól rázzuk fel és azonnal öntsük fel.

A polimerizáció előtt nem szükséges a poliakrilamid gáztalanítása.(Régebben az akrilamidot vákuumba helyezték a buborékok eltávolítására, mert az oxigén gátolja a polimerizációt.)

Vízszintes ragasztópont mintacsúcsok.

· Helyezzen egy darab fekete papírt az alsó dobozba, fekete háttérrel, hogy egy mintanyílást készítsen a tisztább látás érdekében.
· Ragasztótartály töltött pufferrel, közvetlenül a kolloid felett.
· ha a szélén van lámpa, kapcsolja fel a lámpákat, hadd világítson kolloid.Húzza a mintát a pipettába.
· automata pipettázó berendezés használata.
· 10-200 mu-ban 1 folyadékmozgáspont használható a minta legtöbb pontján.Nagyon kicsi (10μ1-nél kisebb) mintalyukak esetén kényelmesebb a ragasztó szekvenálásához használt hosszú pipettafej.

· pipettázás éppen a mintába merítve, lassan mozgó folyadék belélegzése.A minta ragadósnak tűnhet a glicerintől, és a gyors szivattyúzás levegőbuborékokat vonhat be a pipettafejbe.

· a minták a pipettázófej belélegzése után finoman mozgatják a folyadékfejet a cső szélén, vagy a törlőpapír felszívja a folyadékfejet a cseppeken kívül.Ügyeljen arra, hogy ne szívja fel a mintát.

Helyezze a mintát a mintanyílásba

· pipettázó eszköz kis nyomás tartása érdekében, hogy a minták enyhén mozogjanak túlfolyó folyadékfejjel.
· a pufferbe helyezett pipettázófej, valamivel magasabban, mint a pontlyukak, fenntartsa a pozitív nyomást.A pipetta hegye egy kis lyukba helyezhető.
· lassan és egyenletesen távolítsa el a mintákat.A pipetta hegyét a pontszerű mintanyílás fölé kell helyezni, és a minta a lyukba süllyed.Hagyja, hogy a minta lesüllyedjen, hogy kitöltse a mintanyílást, ne nyomja be.
· amint az utolsó csepp minta folyékony fejjel, a folyadék a második lábra kerül, lassan felemeli a folyadékot, kilép a pufferből

Hogyan kell függőleges ragasztómintavételt végezni?

· két üvegdarab között kialakított függőleges ragasztópontos mintanyílások.Nagyon vékony ragasztóban a pipettafejet még két üveglap közé sem lehet beilleszteni.Figyeld a glicerint!Helyezze a pipettafejet a mintanyílás fölé, és a minta a lyukba süllyed.
· pont minta előtt, győződjön meg róla, hogy a függőleges pont a polipropilén acil gél minta lyuk öblítse le.Mossa le a polimerizálatlan akrilamidot és a vizet, amely megjelenhet a mintanyílás alján.A víz jelentősen kisebbítheti a mintanyílást.Használjon 25 ml-es vagy 50 ml-es fecskendőt és 18-as tűt.Öntse be az elektroforézis puffert, és óvatosan öblítse át a mintanyílást.
· nehéz lehet látni a mintanyílást, ugyanakkor a többi könnyű.Ha felesleges lyukak vannak, a mintapuffert brómfenolkékkel lehet tesztelni.