Óvintézkedések a poliakrilamid gélelektroforézisre

· poliakrilamidA gélnek akrilamid -monomerrel, polimerizációs kiindulási anyaggal, katalizátorral, valamint a só- és puffer keverékkel együtt kell együtt kell lennie.

· akril -amidés a bisz (N, N '- metilén-kettős akril-amid) a monomer formájú gélmátrix.

· Az ammónium -persulfát elindítja a ragasztó polimerizációs folyamatot. A ragasztó megfogalmazásához 10% ammónium -perzulfát -oldatot kell készíteni vízben. Az információ nagy része jelezte az aktív használat szükségességét. A 10% -os oldatot azonban több hétig 4 ℃ -en lehet elhelyezni, anélkül, hogy jelentős aktivitási veszteség lenne. Készítsen akár 10 ml -et, és dobja el, ha a ragasztó nem adagol.

Tipp: a százalékos arányakril -amidA ragasztó és a fehérje ragasztó szekvenálásában nem azonos. Ha előadott akril -amid: BIS -oldatot használ, akkor győződjön meg arról, hogy kapja meg a megfelelő palackot.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil-etilén-diamin) katalizátor, egy barna palackban, a hűtőszekrénybe helyezve. Adjon hozzá közvetlenül a ragasztó öntése előtt.

· Az elektroforézisben használt poliakril -amid elektroforézist az egyes idő előtt és után meg kell mosni. Elektroforézis után mossuk le puha kefével és ruhával forró szappanos vízben, öblítsük le desztillált vízzel, és álljunk szárításra.

· A nedvesség és a por üreges polimerrel okozhat. Az elektroforézis előtt tisztítsa meg az üvegtáblát üvegtisztítóval, és törölje le puha kefével. Mossa le desztillált vízzel, és alaposan szárítsa meg egy papír törlést. Az öblítés 70% -os etanollal a papírral való törlés előtt segít megtisztítani és felgyorsítani a szárítást. Adjon hozzá egymást követő akril -amid mintákat: bisz, víz, pufferoldat, ammónium -perzulfát, temed. Jól rázza meg, és azonnal öntsön.

A polimerizáció előtt nem szükséges a poliakrilamidot. (Az akril -amidot vákuumba helyezték a buborékok eltávolítására, mivel az oxigén gátolja a polimerizációt.)

Vízszintes ragasztópont minta tippek.

· Helyezzen egy darab fekete papírt az alsó dobozba, a fekete háttérbe, hogy a minta lyuka világosabbá váljon.
· Ragasztó tartály töltött puffer, közvetlenül a kolloid felett.
· Ha a szélnek van fénye, kapcsolja be a lámpákat, hagyja, hogy a fény ragyogjon kolloidnak. Rajzolja meg a mintát a pipettába.
· Automatikus pipettázó eszköz használata.
· A 10-200 MU-ban 1 folyékony mozgó pont használható a minta legtöbb pontjában. A nagyon kicsi minta lyukakhoz (kevesebb, mint 10 μ1) a szekvenáláshoz használt hosszú pipetta fej sokkal kényelmesebb.

· A pipettázás csak a mintába merítve, lassan mozgó folyadékot adva. A minta ragacsos lehet a glicerinnel, és a gyors szivattyúzás légbuborékokat húzhat a pipetta fejébe.

· A pipettázási fej belélegzése után a minták óvatosan mozgatják a folyadékfejet a cső szélén, vagy a papír törlése a folyékony fejet a cseppek előtt. Vigyázzon, ne szopja a mintát.

Helyezze a mintát a minta lyukba

· Pipettázó eszköz egy kis nyomás megőrzéséhez, a minták kissé mozgatják a túlcsorduló folyékony fejet.
· A pufferbe beillesztett pipettázó fej valamivel magasabb, mint a foltlyukak, fenntartja a pozitív nyomást. A pipetta csúcsa beilleszthető egy kis lyukba.
· Lassan és folyamatosan a mintákat. A pipetta hegyét a pontminta lyuka fölé helyezik, és a minta a lyukba süllyed. Hagyja, hogy a minta süllyedjen, hogy kitöltse a minta lyukat, ahelyett, hogy beillesztené.
· Miután az utolsó csepp minta folyékony fejjel, a folyadék a második lábig mozog, lassan emelje fel a folyadék mozgását, mozogjon a pufferből

Hogyan kell elvégezni a függőleges ragasztó mintavételt?

· A két üvegdarab között képződött függőleges ragasztópont minta. Nagyon vékony ragasztóban a pipetta fejét még két üveglemez közé nem lehet beilleszteni. Nézze meg a glicerint! Helyezze a pipetta fejét a minta lyuk fölé, és a minta süllyed a lyukba.
· Pontminta előtt, ügyeljen arra, hogy a polipropilén -acil gélminta lyuk függőleges pontját tiszta legyen. Mossa ki a nem polimerizált akril -amidot és a minta lyuk alján megjelenő vizet. A víz a minta lyukat lényegesen kisebbé teheti. Használjon 25 ml vagy 50 ml fecskendőt és egy 18 ml-es fecskendőt. Öntsük be az elektroforézis puffert, és óvatosan öblítse le a minta lyukat.
· Nehéz lehet látni a minta lyukat, de ugyanakkor a többi könnyű. Ha vannak felesleges lyukak, a mintapuffer bróm -fenol -kékkel tesztelhető.