· poliakrilamidA gél akrilamid monomerből, polimerizációs kiindulási anyagból, katalizátorból, valamint a só és a pufferkeverék megfelelő részéből áll.
· akrilamidés a BIS (N, N'-metilén kettős akrilamid) a gélmátrix monomerje.
· az ammónium-perszulfát elindítja a ragasztó polimerizációs folyamatát. A ragasztó elkészítéséhez 10%-os ammónium-perszulfát oldatot kell vízben elkészíteni. A legtöbb információ aktív felhasználás szükségességét jelezte. A 10%-os oldat azonban több hétig is eltartható 4°C-on jelentős aktivitásveszteség nélkül. Töltse fel 10 ml-re, és dobja ki, ha a ragasztó nem tapad össze.
Tipp: A százalékos arányakrilamidA szekvenálás során használt ragasztó és a fehérjeragasztó nem ugyanaz. Ha előre elkészített akrilamid:BIS oldatot használ, ügyeljen arra, hogy a megfelelő üveget használja.
· A TEMED (N, N, N ', N'- tetrametil-etilén-diamin) egy katalizátor, barna üvegben, hűtőszekrényben. Közvetlenül a ragasztó kiöntése előtt adjuk hozzá.
· Az elektroforézishez használt poliakrilamid elektroforézis üveget minden egyes alkalom előtt és után el kell mosni. Az elektroforézis után puha kefével és ruhával, forró, szappanos vízben mossa le, majd desztillált vízzel öblítse le, és hagyja megszáradni.
· A nedvesség és a por károsíthatja az üreges polimert. Elektroforézis előtt tisztítsa meg az üveglapot üvegtisztítóval, majd törölje át puha kefével. Mossa le desztillált vízzel, majd alaposan szárítsa meg papírtörlővel. A papírral való törlés előtti 70%-os etanollal való öblítés segít a tisztításban és a száradás felgyorsításában. Adja hozzá egymás után az akrilamid mintákat: BIS, víz, pufferoldat, ammónium-perszulfát, TEMED. Jól rázza fel, majd azonnal öntse ki.
A poliakrilamidot polimerizáció előtt nem szükséges gáztalanítani. (Az akrilamidot korábban vákuumba helyezték a buborékok eltávolítására, mivel az oxigén gátolja a polimerizációt.)
Vízszintes ragasztópont mintavégek.
· Tegyél egy darab fekete papírt az alsó dobozba, fekete háttérrel, hogy néhány mintalyukat készíts, hogy jobban láss.
· ragasztótartályos pufferrel töltött oldat, közvetlenül a kolloid felett.
· Ha a szélén van lámpa, kapcsold fel a lámpákat, hagyd, hogy a fény kolloidálisan világítson. Szívd fel a mintát a pipettába.
· automata pipettázó eszköz használatával.
· 10-200 μM-es lyukakban a legtöbb mintavételi pontban 1 folyadékmozgató pont használható. Nagyon kis mintanyílások (10 μM-nél kisebb) esetén a szekvenáló ragasztóhoz használt hosszú pipettafej kényelmesebb.
· pipettázás közvetlenül a mintába merítve, lassan mozgó folyadék belélegzése. A minta glicerintől ragacsosnak tűnhet, és a gyors pumpálás légbuborékokat vonzhat a pipettafejbe.
· A pipettázó fej belélegzése után a minták esetében a folyadékfej finoman mozgassa a cső szélén, vagy törölje le a papírt, hogy a folyadékfej a cseppeken kívülre kerüljön. Vigyázzon, nehogy a minta a szájába kerüljön.
Helyezze a mintát a mintavételi nyílásba
· pipettázó eszköz kis nyomás fenntartása érdekében, hogy a minták kissé elmozduljanak a túlfolyó folyadékfejjel.
· a pipettafejet a tompítóoldatba helyezve, a pontlyukaknál kissé magasabban, pozitív nyomást kell fenntartani. A pipetta hegye egy kis lyukba helyezhető.
· lassan és egyenletesen nyomjuk ki a mintákat. A pipetta hegyét a mintavételi lyuk fölé helyezzük, és a minta belesüllyed. Hagyjuk, hogy a minta besüllyedjen, hogy kitöltse a lyukat, ahelyett, hogy benyomódna.
· Miután az utolsó csepp minta a folyadékfejjel együtt haladt, a folyadék a második lábra mozdult, lassan emelje fel a folyadékot, és hagyja el a puffert
Hogyan kell függőleges ragasztómintát venni?
· függőleges ragasztópontok, amelyek két üveglap között képződnek a minta lyukai között. Nagyon vékony ragasztó esetén a pipettafejet nem lehet két üveglap közé behelyezni. Figyelj a glicerinre! Helyezd a pipettafejet a minta lyukára, és a minta bele fog süllyedni a lyukba.
· A mintavétel előtt ügyeljen arra, hogy a polipropilén acilgél függőleges pontját tisztára öblítse. Mossa le a polimerizálatlan akrilamidot és a mintavételi lyuk alján esetleg megjelenő vizet. A víz jelentősen csökkentheti a mintavételi lyuk méretét. Használjon 25 ml-es vagy 50 ml-es fecskendőt és 18-as méretű tűt. Öntse bele az elektroforézis puffert, és óvatosan öblítse át a mintavételi lyukat.
· nehéz lehet látni a minta lyukát, de ugyanakkor a többi könnyű. Ha túl sok lyuk van, a mintapuffer brómfenolkékkel tesztelhető.
Közzététel ideje: 2023. márc. 31.